иха или пцр что лучше
Лабораторные тесты на коронавирус Covid-19 простым языком. Как правильно выбрать метод исследования.
Нас интересуют 2 простых вопроса:
Мы коротко описали основные виды тестов на коронавирус, которые сейчас предлагают клиники и лаборатории. Совсем без специфической терминологии не обойтись, но мы постарались описать их максимально понятно. И что самое ценное, рассказали, какие виды тестов показательны в какой период заболевания, что означают положительные и отрицательные результаты того или иного метода и в каких случаях придется пройти повторное тестирование.
Молекулярная диагностика коронавируса (ПЦР)
Важнейшим лабораторным методом является ПЦР в биоматериале, взятом из дыхательных путей (мазок из носа и ротоглотки).
Суть метода ПЦР заключается в том, что генетическая информация вируса (РНК) многократно копируется в лабораторных условиях специальным прибором – амплификатором, увеличивая свою концентрацию в два раза в каждом цикле копирования. Это дает возможность выявить вирус или бактерию даже в тех случаях, когда его количество составляет лишь сотню клеток в миллилитре крови. Если генетическая информация тестируемой бактерии или вируса в пробе отсутствует, то она не копируется и не определяется.
Анализ методом ПЦР обычно проводится тем, у кого есть симптомы респираторного заболевания или тем, кто имел контакты с возможным источником инфекции.
Отсутствие генетического материала возбудителя (отрицательный результат) означает, что человек не инфицирован на момент взятия анализа. Для подтверждения или исключения наличия инфекции тест выполняется повторно через определенные промежутки времени.
ПЦР-диагностика используется для установления факта заболевания коронавирусом. Вирус можно обнаружить сразу после заражения, даже если у пациента еще нет проявлений болезни. Анализ уместно сделать, если вы контактировали с носителем инфекции или находились там, где было возможно заражение. Он также используется для подтверждения диагноза.
Однако молекулярные РНК-тесты не являются абсолютно надежными и могут у значительной части в действительности инфицированных пациентов дать отрицательный результат. Это зависит от достаточности содержания вируса в материале выбранной локализации на той или иной стадии инфекции, качества взятия материала, предела чувствительности теста, присутствия ингибиторов ПЦР и пр. Поэтому в диагностике особое значение придается характерной картине КТ. В дополнение к этим исследованиям и клинической оценке могут быть полезны исследования, направленные на выявление в крови специфических антител, вырабатываемых организмом против SARS-CoV-2.
Нет, мы не хотим вас запутать. Если тест отрицательный, но симптомы присутствуют, не надо читать статьи, нужно обратиться к врачу. Специфику течения любой инфекции никто не отменял. Врач будет использовать дополнительные методы исследования и ставить диагноз. Не занимайтесь самодиагностикой. Для этого нужно было закончить медицинский ВУЗ.
У нас в клинике вы можете пройти исследование РНК коронавирусов SARS-CoV-2 (COVID-19), SARS-CoV и MERS-CoV методом ПЦР (качественное определение). Тест-система разработана в ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Чувствительность используемой тест-системы составляет 103 копии плазмид на миллилитр (10*3).
Тестирование на наличие антител к коронавирусу COVID-19
Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.
Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела класса G появляются на 7 сутки от начала заболевания и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.
По наличию и уровню IgM антител в крови можно судить о текущей или недавно перенесенной инфекции. Антитела IgM появляются уже через несколько дней после первых проявлений болезни (на 2-3 сутки от начала заболевания), их концентрация достигает максимума на 7-10 сутки от начала заболевания и определяются в крови 1- 1,5 месяца. IgM первым вырабатывается среди всех иммуноглобулинов при контакте организма с инфекцией, поэтому их называют иммуноглобулинами первичного иммунного ответа. Их присутствие в крови свидетельствует об острой стадии инфекционного процесса.
Специфические IgG антитела обычно присутствуют в крови длительное время и после выздоровления и могут выполнять защитную роль. Поэтому исследование уровня специфических IgG к SARS-CoV-2 может помочь для прогноза вероятного наличия иммунной защиты в результате перенесенной инфекции. Таким образом, определение IgG не используется при ранней диагностике инфекции – он обнаруживается в крови через две недели от начала заболевания, пик его определяется через месяц и продолжительность определения его пока неизвестна. IgG определяет появление иммунитета в дальнейшем.
Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител.
У нас в клинике вы можете пройти экспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы работаем только с аккредитованными Роспотребнадзором лабораториями.
Экспресс тест на коронавирус (ИХА)
Экспресс тесты проводятся методом иммунохроматографии (ИХА), не требуют использования специального оборудования, но требуют присутствие медсестры, так как забор крови производится из пальца. Продолжительность процедуры анализа находится в пределах 10-30 минут
Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции).
Существует два типа быстрых тестов на COVID-19:
Процедура анализа чрезвычайно проста:
Анализ на антитела к коронавирусу (ИФА)
Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) – полуколичественный анализ, им определяется количество выявленных антител IgM и IgG. Берется венозная кровь, а для исследования используется сыворотка крови.
Показания для назначения анализа на антитела к коронавирусу COVID-19:
В двух словах, чем отличается ИФА и ИХА? В каком случае достаточно эксперсс теста (ИХА), а когда нужно точно делать количественный (ИФА)?
Дополнительные методы диагностики
Кроме указанных выше специфических анализов, у больных коронавирусной инфекцией, и для лиц с подозрением на это заболевание, определяют газы, растворенные в крови, печеночные и почечные пробы, миоглобин, ферменты миокарда, скорость оседания эритроцитов, С-реактивный белок, общий анализ мочи и проводят другие исследования, которые позволяют уточнить состояние пациента и назначить нужное лечение.
Коротко обо всех методах диагностики коронавируса
Тест на коронавирус и антитела к нему – взаимодополняющие диагностики.
Тест на коронавирус- это определение вируса в мазке из ротоглотки методом ПЦР. Он используется для того, чтобы установить наличие коронавируса на самых ранних стадиях, даже если у вас нет никаких симптомов проявлений болезни. Но при этом используется обычно при наличие симптомов, либо при положительном анализе на антитела М.
Анализ на антитела к коронавирусу позволяет выявить как заболевших в острой стадии, так и уже переболевших коронавирусом COVID-19.
Наличие специфических антител класса M (иммуноглобулинов IgM) выявляются в крови в острой фазе заболевания и вскоре после выздоровления снижаются. Наличие специфических антител класса G (иммуноглобулинов IgG) в сыворотке крови говорит о факте инфицирования вирусом SARS-CoV-2 в прошлом и о сформированном специфическом иммунном ответе (наличие иммунитета).
Как понять, болею ли я сейчас и могу ли быть заразен?
Как понять, болел ли я в прошлом и есть ли иммунитет?
Методы исследований и интерпретация результатов
А это самый полезный и заключительный раздел статьи, в котором мы поможем вам разобраться, какие результаты дают разные методы исследований и что они означают.
Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Почему? Потому что отдельно результаты по IgM или IgG не всегда могут дать понимание текущей ситуации.
3 вида тестов на коронавирус: преимущества и различия
Статья размещена: 2 Ноября 2021
Последнее изменение: 05 Октября 2020
Быстрая и надежная диагностика Covid-19 – это первый шаг к его лечению и профилактике. Чтобы определить наличие вируса в организме, применяются разные методы исследования. К ним относится экспресс-тестирование на антитела, методика ПЦР и LAMP. Здесь всего за несколько минут вы сможете узнать, какой из этих тестов более эффективный, как они проводятся и сколько занимают по времени.
ПЦР-тест
Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) является более точным способом выявления инфекции Covid-19. В отличие от других способов диагностики он направлен не на обнаружение антител, вырабатываемых организмом при заболевании, а непосредственно на сам вирус. Это позволяет определить, болеет человек коронавирусной инфекцией в настоящий момент или нет. ПЦР-тест наиболее эффективен в том случае, если он сделан в течение 7-10 дней с возникновения первых симптомов инфекционного заболевания.
Как проводится тест ПЦР? Забор биоматериала из носоглотки для исследования производится при помощи тампона. Для этого необходимо обратиться в лабораторию или вызвать специалистов частной клиники на дом (например, если вы не хотите контактировать с другими людьми).
Кому рекомендуется тестирование ПЦР? Если вы контактировали с человеком, болеющим Covid-19.
Через сколько будут известны результаты исследования? В среднем, для получения результатов необходимо около 24 часов. При обращении в государственные лаборатории срок ожидания может увеличиться до 2-3 дней и более.
Насколько точно тестирование ПЦР? Это самый надежный метод выявления Covid-19. По данным исследований, клиническая чувствительность тестов составляет около 80%, поэтому получение ложноотрицательного или ложноположительного результата сведено к минимуму.
Тест на антитела к Covid-19
При проникновении вируса в организм иммунная система начинает вырабатывать специфические антитела (Ig – иммуноглобулины), предназначенные для защиты от инфекции. Тесты на антитела к Covid-19 определяют их наличие и поэтому позволяют узнать, болеет человек коронавирусом или уже переболел ранее.
Всего в организме человек существует 5 видов антител: IgM, IgG, IgA, IgD, IgE. В основном, при коронавирусной инфекции вырабатываются:
Для тестирования на антитела применяется иммуноферментный (ИФА) либо иммунохемилюминесцентный (ИФЛА) анализ. Это экспресс-тестирование, показывающее количество антител IgM и IgG. Проводится в лаборатории или в домашних условиях, если вызвать специалистов частной клиники для забора биоматериала на дом.
Как проводится скрининг? Применяется образец крови, взятой из вены или пальца. Биоматериал и специальный раствор наносится на тест-карту. Результат определяется после полного проявления цветных полос, количество и расположение которых указывает на наличие иммуноглобулинов.
Кому рекомендуется экспресс-тестирование? Министерство здравоохранения России рекомендует пройти тест ИФА:
Через сколько будут известны результаты исследования? В течение 10-15 минут. Скорость – это главное преимущество исследований на антитела, поэтому методы ИФА и ИФЛА остаются одними из самых популярных при диагностике коронавирусной инфекции.
Насколько точно исследование на антитела? Точность методов ИФА и ИФЛА достигает 60-65%. Чаще всего получение ложноотрицательного или ложноположительного результата связано с неправильным забором биоматериала, поэтому обращайтесь только к профессионалам.
Метод LAMP
Метод петлевой изотермической амплификации (LAMP) считается «упрощенной» версией исследования ПЦР. Относится к тест-системам, при этом производители настаивают на том, что их точность составляет 94%. Методика LAMP также основана на том, что РНК вируса достраивается до ДНК, а затем происходит копирование при постоянной температуре 65 °C. Исследование проводится в лабораторных исследованиях.
Как проводится LAMP? Чтобы определить Covid-19 этим методом, происходит забор биоматериала из носоглотки. Затем для получения точного результата к нему добавляются праймеры (фрагмент нуклеиновой кислоты) и состав исследуется в лабораторных условиях.
Кому рекомендуется диагностика LAMP? Тем, кто контактировал с лицами, больными Covid-19, а также людям, входящим в группу риска (например, пожилым людям и тем, у кого имеются тяжелые хронические заболевания).
Через сколько будут известны результаты? В течение 20-40 минут. Метод LAMP на данный момент не применяется в государственных лабораториях. Однако его используют в частных клиниках для подтверждения результатов экспресс-тестирования.
Насколько точно исследование LAMP? Данные об эффективности этого метода диагностики отсутствуют. Однако, по мнению многих специалистов, его точность схода с методикой полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Какой способ диагностики лучше?
Все методы, применяемые для выявления Covid-19, успешно применяются в диагностике заболевания. Они отличаются по методу и показаниям к проведению, а также по длительности получения результатов. Однако применяются в разных случаях, поэтому имеют равную эффективность.
Если вы находитесь в тесном контакте с человеком, болеющим коронавирусом, рекомендуется ПЦР-исследование. В отличие от остальных методик оно занимает больше времени, но позволяет получить максимально точные данные.
Если вы хотите узнать, переболели ли уже Covid-19, рекомендуется экспресс-тест на антитела. Он занимает минимум времени и позволяет узнать, на какой стадии развития находится заболевание, и переболели ли вы им раннее (например, если коронавирус прошел в бессимптомной форме).
Если вы входите в группу риска заражения Covid-19, рекомендуется экспресс-тест на антитела или исследование LAMP. Обе методики быстро проводятся и имеют сравнительно высокую эффективность, поэтому вероятность получения ложного результата минимальна.
Полезные рекомендации
Самое важное – это выбрать лабораторию. Обращайтесь только в надежные места, чтобы быть уверенным в точности диагностики. В 2020 году исследования проводят как государственные лаборатории, так и частные клиники. В последнем случае вы можете вызвать специалистов для забора биоматериала на дом и гораздо быстрее получите результаты
Следующий нюанс – это момент сбора биоматериала. Если он будет проведен неправильно, то возрастет риск получения ложного положительного или ложного отрицательного результата. Чтобы этого избежать, необходимо соблюдать некоторые правила:
Если результаты оказались положительными, то не паникуйте. Своевременное обнаружение Covid-19 обеспечивает быстрое лечение. При обращении в частные клиники оно разрабатывается индивидуально, поэтому позволяет быстро побороть вирус и избежать дальнейшего развития инфекции.
ПЦР или ИФА. Когда необходимы оба исследования, а когда можно обойтись одним из них?
Давайте поговорим об одном из важнейших вопросов в диагностике инфекционных заболеваний у животных. На данную тему многое сказано и написано, но у владельцев и заводчиков до сих пор возникают вопросы и сложности. В настоящее время ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) являются наиболее достоверными методами диагностики инфекционных заболеваний у животных и человека. Основанные на последних достижениях молекулярной биологии, данные способы исследования быстро вошли в ветеринарную практику и, тем самым, значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Каждый из этих методов позволяет оценить ситуацию с определенной стороны, в зависимости от цели, которая ставится при исследовании.
ПЦР – один из самых точных и чувствительных методов в лабораторной диагностике. Он обнаруживает макромолекулы ДНК или РНК возбудителей даже в случае присутствия незначительного их количества в пробе. Генетический материал бактериальной или вирусной инфекции индивидуален, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью. Принцип ПЦР заключается в том, что происходит многократное избирательное копирование искомого участка генетического кода предполагаемой инфекции. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Важным достоинством является то, что вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы до того, как проявятся первые симптомы. Метод ПЦР незаменим для выявления латентных (скрытых) и хронических инфекций.
ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антител к различным возбудителям инфекций, а именно – антигенам. Также антигенами могут выступать собственные клетки организма, образующиеся в результате аутоиммунных или онкологических заболеваний. Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая в настоящее время составляет более 90% и позволяет обнаружить реакцию организма животного на инфекционный процесс.
Достоинства ИФА — возможность диагностики через 1-3 недели после контакта с возбудителем инфекции и возможность прослеживать динамику развития заболевания.
ИФА, относясь к непрямым методам диагностики, основан на выявлении не самой инфекции, а продуктов ее жизнедеятельности в организме животного — белков–маркеров – иммуноглобулинов, которые вырабатывает иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела, которые впоследствии и будут идентифицированы системой ИФА. Время обнаружения антител зависит как от самой инфекции, так и от особенностей иммунной системы конкретного животного.
Метод ИФА ищет «следы» реакции на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!
Наличие иммуноглобулинов не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента.
Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет.
Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими методами – ПЦР, бактериологические посевы.
Определить, какой лучше сдать анализ для диагностики, в каждой конкретной ситуации может только врач, назначающий обследование. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме животного (ИФА), с последующим контролем после проведенного лечения.
Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать и в этом случае необходимо грамотно интерпретировать полученные результаты, основываясь на патогенезе предполагаемого инфекционного заболевания.
Амплификатор BIO RAD T-100
Во-первых, стоит помнить, что ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено (например, смывом из глаза или из носа). Для ИФА–диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР–диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, микроорганизмы семейства Chlamydiacеae могут локализироваться в организме животных в различных местах. И анализ ПЦР, взятый в неправильной области, ДНК хламидии не обнаружит. Но ИФА–метод все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс. В таком случае необходимо сдавать оба анализа для подтверждения инфекционной природы заболевания.
Единственным ограничением продукции антител в организме при наличии инфекции может быть иммунодефицитное состояние у животного, например, при лейкозе или иммунодефиците у кошек.
Во-вторых, если результат ИФА пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению инфекционного заболевания, необходимо сопоставить данный результат с клинической картиной и, возможно, результатами других методов обследования. Известно, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула тело, то есть остается так называемый «серологический шрам» – след от уже перенесенной инфекции. Причем, в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы, положительный результат ИФА–диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления животного. Но возможно и обратное, например, после лечения хламидиоза, микоплазмоза – заболеваний, поражающих органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, репродуктивные органы, уровень антител в крови значительно снижается, так как иммунитет против этих заболеваний у животных не развивается.
Следует помнить, что антитела в организме могут образовываться в ответ на недавнюю вакцинацию и высокий их уровень, очевидно, может быть связан с искусственным введением антигена в организм животного.
Немаловажно то, что материал, взятый сразу после лечения инфекции, может содержать мертвые частицы микроорганизмов, которые метод ПЦР идентифицирует за счет своей высокой чувствительности. В таком случае, результат будет ложноположительный.
Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдаться и в том случае, если инфекция «свежая», даже при наличии определенных симптомов заболевания уровень антител в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. При данных ситуациях необходимы не только оба исследования, но и клинический анализ крови, и дополнительные методы оценки клеточного иммунитета.
Получение положительного результата ПЦР может быть вызвано использованием тест-систем, которые выявляют все виды бактерий, в том числе и те, которые в определенном количестве в норме содержатся в организме животного. Например, тест-система для ПЦР–диагностики настроена на выявление всех видов микроорганизмов семейства Chlamydiaceae: Chlamydophila Pneumonia, C. Psitaci, C. Abortus, C. felis. Однако хламидиями заражено примерно 18-38% собак, а клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях. Носительство хламидий выявляется также у 65-70 % кошек. Кошки – латентные носители возбудителя (содержится в слюне, моче, экскрементах, на лапках внешне здоровых животных). Поэтому положительный результат ПЦР–анализа в таком случае должен быть правильно интерпретирован врачом, согласован с материалом исследования, картиной заболевания и, обязательно, ИФА – диагностикой крови пациента.
Другой пример: у кошек встречается несколько видов микроорганизмов рода Mycoplasma, чаще всего М. felis и М. gatae. Это частые обитатели слизистых оболочек, М. felis и М. gatae обнаруживаются у 70-80% здоровых кошек. Предполагается, что М. felis может быть патогенной, а М. gatae – естественный коммерсал конъюнктивы и верхних дыхательных путей кошек (то есть безвредная микрофлора). При проведении ПЦР–анализа результат может быть положительным, а ИФА – отрицательным, вследствие отсутствия специфической реакции организма на присутствующую условно-патогенную микрофлору, следовательно, возможное заболевание, например, конъюнктивы глаз было вызвано не данным микроорганизмом.
Ветеринарному врачу необходимо понимать патогенез того или иного заболевания, так коронавирусная инфекция кошек, вызываемая семейством Coronaviridae, а именно штаммами FIPV, подавляет иммунитет, и антитела к возбудителю могут и не обнаруживаться. Положительный результат ИФА говорит о наличии в организме коронавируса, но не дает информации о том, где этот вирус находится – в кишечнике или в тканях.
В связи с этим важным является непосредственное выявление возбудителя заболевания – ПЦР. Однако использование метода ПЦР не может позволить провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в организме и отличить состояние носительства от заболевания, вызывающего тяжелый перитонит, как правило, с летальным исходом. Положительный ответ ПЦР при выделении вируса с фекалиями говорит о том, что животное в данный момент представляет опасность для окружающих кошек. Согласно ряду исследований, некоторые кошки, в организме которых еще находится вирус, перестают распространять его в течение нескольких недель. Но есть вероятность длительного вирусоносительства, с повторяющимися периодами выделения вируса во внешнюю среду со слюной и фекальными массами.
Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР–анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА–диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.
Заведущая лабораторий – Тосторожева А.Б. ВЛДОЦ СТАТУС. Март 2017 г.